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一種Co-IP的代替方法

----15min出結果的神秘！

分子間相互用是細胞接受信號和傳遞信號的基礎，是研究藥物作用的本質所在，因此研究分子間的相互作用對于揭示生命起源、細胞病變、藥物開發(fā)等是不可忽視的過程，也是當前生命科學與醫(yī)藥領域的研究熱點；傳統(tǒng)研究分子相互作用的方法眾多，包括酵母雙雜、噬菌體展示、Elisa、Western、FRET、Co-IP、Pulldown及無標記SPR 技術，在目前所有標記技術中Co-IP 實驗比較常用，其可以直接分析來自體內(nèi)的特定蛋白之間是否存在相互作用，但是具有很多局限性且實驗效率低。相比之下，實時無標記SPR技術作為研究分子互作的新秀，在分子互作研究中具有諸多優(yōu)勢！

下面我們具體聊聊CO-IP與SPR之間的差別：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation），簡稱 Co-IP，是體外利用特定抗體沉淀相應抗原，并將與該抗原相互結合的其他分子共同沉淀的方法，之后通過western 雜交鑒定與抗原相互作用的蛋白，也可與質譜聯(lián)用，主要用于研究蛋白質相互作用?？捎糜诖_定特定蛋白在天然狀態(tài)下的結合情況，也可通過質譜找到未知蛋白。

CO-IP實驗流程圖

Co-IP技術中，由于手動步驟較多，因次實驗會受到操作者的影響；

且具有以下局限性：

1.早期的瓊脂糖beads因顆粒小，離心后容易被攪動起來，因此wash步驟很 難掌控。

2.Beads損失或殘留多余液體，會使靶蛋白損失或產(chǎn)生假陽性信號。

3.孵育時間過長導致雜蛋白進入beads孔隙被洗脫出來，影響背景。

4.對于親和力低的瞬間的蛋白與蛋白的互作不易檢測到。

5.實驗過程繁瑣，耗時將近兩天。

6.重復性差，很難取得重復性結果。

SPR 技術即表面等離子技術，采用實時無標記的檢測方式，倍受科學家們的青睞；來自Nicoya的下一代SPR技術即LSPR 技術（Local Surface PlasmonResonance）即局域表面等離子共振技術，基于納米金顆粒的檢測技術，通過檢測溶液中的分子與固定到芯片表面配體結合時引起的光的吸收峰的變化，分析分子之間的相互作用，只需保證配體和分析物有一個是純的物質，即可像Co-IP 一樣分析特定蛋白天然狀態(tài)下的結合情況，并且同樣可以和質譜聯(lián)用，分析結合相中的未知蛋白，幫助快速找到靶標，在分子互作研究領域脫穎而出。

SPR 技術檢測蛋白分子互作時，只需通過簡單的幾個步驟，如只需將蛋白X的抗體固定到芯片上，之后注入蛋白X即可將其沉淀下來，并同時與 X 在體內(nèi)結合的蛋白質 Y 或者 Z 等也能共同被沉淀下來。并利用雙抗夾心法驗證Y或Z 蛋白，時間只需15min，也可洗脫分析相上質譜、測序儀分析未知的蛋白或核酸，將傳統(tǒng)Co-IP 2天的實驗縮短到15min，并且還可獲得跟多數(shù)據(jù)如動力學參數(shù)，評估蛋白活性、表達量、相互作用強弱等；且檢測樣本類型涵蓋多肽，抗體，核酸，適配體，納米材料，小分子等相互作用的動力學分析。

在SPR技術中，無需微珠，無需標記，也不必擔心操作原因引起實驗失??；檢測靈敏度高，獲得的動力學參數(shù)可做更深入的機制分析，相對Co-IP 具有很多的優(yōu)勢：

SPR優(yōu)勢：

1. 操作步驟簡單，無需電泳、轉膜等繁瑣步驟

2. 檢測周期短：15min出結果

3. 無需標記、實時結果檢測

4. 實驗人為因素小，重復性高

5. 多數(shù)據(jù)獲?。簞恿W參 Ka,Kd,KD

綜合比較SPR與CO-IP實驗：

相同點：

（1）測定兩種甚至更多種蛋白質是否在體內(nèi)結合；

（2）鑒定一種特定蛋白質的作用搭檔；

（3）分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復合物。

傳統(tǒng)SPR技術的儀器使用復雜，讓很多老師望而卻步，加拿大Nicoya公司的下一代的LSPR技術系統(tǒng)OpenSPR，其以操作簡單但不失精確結果的優(yōu)勢正逐漸占領市場，且LSPR的成本甚至低于CO-IP，并在實驗周期和重復性上具有很大優(yōu)勢。

自我們普瑞麥迪2016年8月正式引進到中國后，全國高校爭先試用，目前清華，北大，中科院，二軍大、上海交大、西安交大、南京大學、軍科院、四川大學、西南大學等都已試用，并取得良好的反響和申報計劃。武漢大學、山東大學、北大腫瘤醫(yī)院、西南大學等已成功申購我們的OpenSPR。

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