SB色譜柱的基本原理是利用樣品混合物中各組分理、化性質(zhì)的差異,各組分程度不同的分配到互不相溶的兩相中。當兩相相對運動時,各組分在兩相中反復多次重新分配,結(jié)果使混合物得到分離。
SB色譜柱的維護:
1.使用保護柱
2.大多數(shù)色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5,盡可能在此范圍內(nèi)使用
3.避免流動相組成及極性有劇烈變化
4.流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理
5.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,要在實驗完畢將柱子沖洗干凈
6.壓力升高時更換保護住
SB色譜柱的安裝步驟/方法:
1.檢查氣體過濾器、載氣、進樣墊和襯管等檢查氣體過濾器和進樣墊,保證輔助氣和檢測器的用氣暢通有效。如果以前做過較臟樣品或活性較高的化合物,需要將進樣口的襯管清洗或更換。
2.將螺母和密封墊裝在色譜柱上,并將色譜柱兩端要小心切平
3.將SB色譜柱連接于進樣口上色譜柱在進樣口中插入深度根據(jù)所使用的GC儀器不同而定。正確合適的插入能zui大可能地保證試驗結(jié)果的重現(xiàn)性。通常來說,色譜柱的入口應(yīng)保持在進樣口的中下部,當進樣針穿過隔墊插入進樣口后如果針尖與SB色譜柱入口相差1-2cm,這就是較為理想的狀態(tài)。(具體的插入程度和方法參見所使用GC的隨機手冊)避免用力彎曲擠壓毛細管柱,并小心不要讓標記牌等有鋒利邊緣的物品與毛細柱接觸摩擦,以防柱身斷裂受損。將色譜柱正確插入進樣口后,用手把連接螺母擰上,擰緊后(用手擰不動了)用扳手再多擰1/4-1/2圈,保證安裝的密封程度。因為不緊密的安裝,不僅會引起裝置的泄漏,而且有可能對SB色譜柱造成*損壞。
4.將色譜柱連接于檢測器上其安裝和所需注意的事項與色譜柱與進樣口連接大致相同。如果在應(yīng)用中系統(tǒng)所使用的是ECD或NPD等,那么在老化色譜柱時,應(yīng)該將柱子與檢測器斷開,這樣檢測器可能會更快達到穩(wěn)定。
5.確定載氣流量,再對色譜柱的安裝進行檢查注意:如果不通入載氣就對色譜柱進行加熱,會快速且*性的損壞色譜柱。
6.SB色譜柱的老化色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后,就可以對色譜柱進行老化了。對色譜柱升至一恒定溫度,通常為其溫度上限。特殊情況下,可加熱至高于zui高使用溫度10-20℃左右,但是一定不能超過SB色譜柱的溫度上限,那樣極易損壞色譜柱。當?shù)竭_老化溫度后,記錄并觀察基線。初始階段基線應(yīng)持續(xù)上升,在到達老化溫度后5-10分鐘開始下降,并且會持續(xù)30-90分鐘。當?shù)竭_一個固定的值后就會穩(wěn)定下來。如果在2-3小時后基線仍無法穩(wěn)定或在15-20分鐘后仍無明顯的下降趨勢,那么有可能系統(tǒng)裝置有泄漏或者污染。遇到這樣的情況,應(yīng)立即將柱溫降到40℃以下,盡快的檢查系統(tǒng)并解決相關(guān)的問題。如果還是繼續(xù)的老化,不僅對SB色譜柱有損壞而且始終得不到正常穩(wěn)定的基線。
7.設(shè)置確認載氣流速對于毛細管色譜柱,載氣的種類高純度氮氣或氫氣。載氣的純度大于99.995%,而其中的含氧量越少越好。如果您使用的是毛細管色譜柱,那么依照載氣的平均線速度(cm/sec),而不是利用載氣流量(ml/min)來對載氣做出評價。因為柱效的計算采用的是載氣的平均線速度。推薦平均線速度值:氮氣:10-12cm/sec氫氣:20-25cm/sec載氣雜質(zhì)過濾器在載氣的管線中加入氣體過濾裝置不僅可以延長SB色譜柱壽命,而且很大程度的降低了背景噪音。建議安裝一個高容量脫氧管和一個載氣凈化器。使用ECD系統(tǒng)時,能在其輔助氣路中也安裝一個脫氧管。
8.柱流失檢測在色譜柱老化過程結(jié)束后,利用程序升溫作一次空白試驗(不進樣)。一般是以10℃/min從50℃升至zui高使用溫度,達到zui高使用溫度后保持10min。這樣我們就會的到一張流失圖。這些數(shù)值可能對今后作對比試驗和實驗問題的解決有幫助。在空白試驗的色譜圖中,不應(yīng)該有色譜峰出現(xiàn)。如果出現(xiàn)了色譜峰,通常可能是從進樣口帶來的污染物。如果在正常的使用狀態(tài)下,SB色譜柱的性能開始下降,基線的信號值會增高。